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HPLC : définition
L'HPLC (chromatographie liquide haute performance) sépare les composants d'un échantillon en le faisant passer sous pression dans une colonne. C'est la méthode de référence pour mesurer la pureté d'un peptide.
| Méthode type | Phase inverse, colonne C18, gradient eau/acétonitrile + TFA |
|---|---|
| Détection | UV 214-220 nm |
Comment ça marche pour les peptides
On utilise presque toujours une HPLC en phase inverse : la colonne est hydrophobe (souvent C18) et l'on fait varier la proportion d'eau et d'acétonitrile. Les molécules sortent à des temps différents selon leur hydrophobie, et un détecteur UV (généralement à 214-220 nm, longueur d'onde de la liaison peptidique) les enregistre.
Le résultat est un chromatogramme : chaque pic correspond à un composé, et son aire à sa quantité relative.
Ce qu'elle ne dit pas
L'HPLC mesure la pureté, pas l'identité. Deux molécules différentes peuvent sortir au même moment. C'est pourquoi on la combine avec la spectrométrie de masse (LC-MS).
Voir aussi
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Sources
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